大鼠熱休克蛋白-20（HSP-20）ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿，細胞上清及相關(guān)液體樣本中熱休克蛋白-20（HSP-20）的含量。
熱休克實(shí)驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠熱休克蛋白-20（HSP-20）水平。用純化的大鼠熱休克蛋白-20（HSP-20）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入熱休克蛋白-20（HSP-20），再與HRP標記的HSP-20抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的HSP-20呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD值），通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中大鼠熱休克蛋白-20（HSP-20）濃度。
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，
在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的OD
值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋
倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值
代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。 （此圖僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值為0.92以上。
2.批內與批見(jiàn)應分別小于9%和15%
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月
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