大鼠心肌細胞(H9c2)細胞培養說(shuō)明書(shū)
細胞介紹
B. Kimes and B. Brandt從源于BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆了H9c2(2-1)細胞株，它表現許多骨骼肌的特性。這個(gè)細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應。如果培養基中的血清濃度下降到1%，融合發(fā)生得很快。
細胞特性
1） 來(lái)源：心臟
2） 形態(tài)：成肌細胞，貼壁生長(cháng)
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的*培養基。
4） 如果細胞長(cháng)滿(mǎn)（90%以上）請及時(shí)進(jìn)行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的*培養基。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現污染或疑似污染，請及時(shí)與我們取得聯(lián)系。
細胞用途：僅供科研使用。
本公司的細胞培養操作規程，供參考
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養基(DMEM-H，GIBCO，貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%（注：血清要求為北美或澳洲血清）。（DMEM液體培養基：GIBCO，11995-065）。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。
3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養液后吹勻。
4. 移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。
3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，先要消化處理并進(jìn)行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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