小反芻獸疫抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名：小反芻獸疫抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus （ELISA）

【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒

【預期用途】 小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一種急性接觸性傳染病，其特征為口腔、舌粘膜糜爛、流淚、流鼻液。本病的易感動(dòng)物為山羊，也可感染綿羊、白尾鹿等，但對牛無(wú)感染性。

本試劑用于檢測羊血清中小反芻獸疫病毒抗體，可用于小反芻獸疫疫苗免疫效果評價(jià)。

【原理】

    本試劑盒系由預包被小反芻獸疫病毒重組抗原的酶標板、抗體工作液、酶標記物及其他配套試劑組成，應用競爭酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測羊血清、血漿樣本中小反芻獸疫病毒抗體。實(shí)驗時(shí)在酶標板中加入待檢樣本和抗體工作液，經(jīng)溫育后洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有小反芻病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標板上抗原結合，從而使后續反應不出現顯色；反之則出現顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關(guān)；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長(cháng)測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有小反芻獸疫病毒抗體。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 儲存于陰涼干燥處（2-8℃），有效期期12個(gè)月。

    包被板開(kāi)封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長(cháng)的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

【樣品準備】

1.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水20倍稀釋成工作洗滌液。

2.取動(dòng)物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長(cháng)期需置-20℃保存。

3.用工作洗滌液將待檢血清樣本按5倍稀釋?zhuān)ㄈ?0μl樣本加入40μl工作洗滌液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對照不用稀釋。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽(yáng)性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽(yáng)性對照孔分別加入陰、陽(yáng)性對照50μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品50μl。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，置37℃反應30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標記物100μl，置37℃反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應15分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長(cháng)）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】實(shí)驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥1.0，陽(yáng)性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。

【檢驗結果的解釋】

1.PI（阻斷率）=（1-樣本值/陰性對照孔均值）×100%，PI≥50%為陽(yáng)性；PI＜50%為陰性。

2.本實(shí)驗結果為陰性表明羊只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測羊血清中小反芻獸疫病毒抗體，根據PI值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實(shí)驗操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實(shí)驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來(lái)水沖洗。

3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應恢復至室溫方可開(kāi)袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結晶，使用時(shí)需恢復至室溫以*溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

8.不同批號試劑組分不得混用。

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