MCF-7/adr 人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株
Human Breast Cancer Adriamycin Resistant Cell Line ,MCF7/adr
貨號：YJ-h253（提供MCF-7細胞STR鑒定）
價(jià)格： 2500.0
規格： 1*106
細胞介紹
MCF-7/Adr為由MCF-7細胞構建的耐Adr藥物細胞株。
細胞特性
1）來(lái)源：人乳腺癌細胞耐藥篩選 | 2）形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長(cháng) |
3）含量：>1×10^6 細胞數 | 4）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝 |
5）用途：僅供科研使用。 |
細胞運輸、保存及注意事項
復蘇細胞 | 凍存細胞 | |
包裝 | 充液的T25細胞培養瓶 | 1mL凍存管 |
運輸條件 | 常溫 | 干冰 |
保存方式 | 37℃恒溫細胞培養箱 | -80℃冰箱中保存過(guò)夜后轉入液氮 或立即復蘇 |
※注意事項 | 1. 收到細胞后，若發(fā)現培養瓶破損、漏液及細胞有污染；或凍存管有破損，融化、漏液等，請立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細胞培養瓶/凍存管外觀(guān)，顯微鏡下細胞照片（100倍，200倍各2張）； 2. 若收到的復蘇細胞有少量細胞脫落、飄起，可能由于運輸途中導致。請先于37℃恒溫細胞培養箱中靜置2~3h后，再進(jìn)行處理； 3. 復蘇細胞的充液培養基為不含藥物的維持培養基，血清濃度較低，收到細胞后請及時(shí)更換為完全培養基； 4. 建議收到細胞后，首先進(jìn)行擴增（至少3代），并凍存部分細胞以備用。 5. 初次培養，當細胞匯合度達約80%時(shí)，可加入400ng/mL ADR的完全培養基培養至細胞完全融合后傳代。細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至500ng/mL繼續培養；若此過(guò)程中細胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養基培養，至細胞匯合度達80%左右，且生長(cháng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR藥物濃度。 6. 細胞凍存過(guò)程中，不可添加藥物。 | |
細胞培養試劑的配制
1）ADR藥物的配制及保存
建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物，使其完全溶解后，使用0.22um濾器過(guò)濾除菌。
注意：可根據用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復凍融導致藥物失效。溶解后的Taxol，4℃保存1周，-20℃保存1個(gè)月，-80℃保存6個(gè)月。
2）凍存液的配制
90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO，現用現配。（凍存液中不含藥物）
3）完全培養基的配制（推薦使用YJ-h253-001b）
成分 | 體積/濃度 |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10% |
雙抗 | 1% |
500ng/mL ADR | 0.05%母液（1mg/mL） |
RPMI-1640培養基 | 補充至所需體積 |
細胞培養條件
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%~80%。
細胞處理
1）凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養基重懸細胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養基的培養瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細胞培養箱中過(guò)夜培養。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
注意：①細胞復蘇過(guò)程中，不可使用含有藥物的培養基。須在細胞生長(cháng)至匯合度達80%左右時(shí)，方可添加400ng/mL ADR藥物；若細胞生長(cháng)狀態(tài)較為緩慢，可適當降低ADR的濃度（首次降低一半藥物濃度），或使用不含藥物的完全培養基培養至細胞生長(cháng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR濃度。
②建議復蘇細胞時(shí)始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸，造成人員傷害。
2）細胞傳代（建議以同等底面積的培養瓶/皿按照1：2比例傳代）
①待細胞密度達到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代培養。
②棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，吸凈殘余的PBS。
③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化2~5min，顯微鏡下觀(guān)察細胞細胞大部分變圓并脫落，即可輕拍培養瓶至細胞全部脫落。迅速拿回操作臺，加入2倍體積的、含10%FBS的培養基中止消化。
④將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。
⑤向細胞沉淀中加入1~2mL完全培養基重懸細胞，輕吹混勻。將細胞懸液按1：1的比例均勻鋪于2個(gè)新的培養瓶/皿中，添加6~8mL完全培養基。
注意：細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至500ng/mL繼續培養；若此過(guò)程中細胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養基培養，至細胞匯合度約80%，且生長(cháng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR藥物濃度。
3）細胞凍存
①細胞凍存時(shí)，步驟同2）細胞傳代的①~④，細胞計數后，加入配制好的細胞凍存液，重懸細胞，按照1×10^6 ~ 1×107個(gè)細胞/mL分配到一個(gè)凍存管中，標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。
注意：細胞凍存過(guò)程中，不可添加藥物。
②將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過(guò)夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
注意事項
1.收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(shí)（視細胞密度而定）穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照（建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片，觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
從2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫學(xué)實(shí)驗技術(shù)及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗服務(wù)及論文潤色十多年，是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!
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